Potencial prognóstico de células inflamatórias e PD-L1 solúvel em carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço

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dc.contributor.advisor-co1Co-orientador1
dc.contributor.advisor-co1IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.advisor-co2Co-orientador2
dc.contributor.advisor-co2IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.advisor-co2Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.advisor-co3Co-orientador3
dc.contributor.advisor-co3IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.advisor-co3Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.advisor-co4Co-orientador4
dc.contributor.advisor-co4IDID do co-orientador4
dc.contributor.advisor-co4LattesLattes do co-orientador4
dc.contributor.advisor1Zeidler, Sandra Lúcia Ventorin von
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000-0002-8897-5747
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5785612863130498
dc.contributor.advisor2Orientador2
dc.contributor.advisor2IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.advisor2Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.authorDaniel, Camila Batista
dc.contributor.authorIDhttps://orcid.org/
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee1Santos, Eldamária de Vargas Wolfgramm dos
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee2Errera, Flavia Imbroisi Valle
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee3Arantes, Lidia Maria Rebolho Batista
dc.contributor.referee3IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee4Mendonça, Elismauro Francisco de
dc.contributor.referee4Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee55º membro da banca
dc.contributor.referee5IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee5Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee66º membro da banca
dc.contributor.referee6IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee6Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.contributor.referee77º membro da banca
dc.contributor.referee7IDhttps://orcid.org/
dc.contributor.referee7Latteshttp://lattes.cnpq.br/
dc.date.accessioned2024-10-17T13:06:32Z
dc.date.available2024-10-17T13:06:32Z
dc.date.issued2024-04-16
dc.description.abstractImmunosuppression is recognized as a hallmark of cancer and has been associated with worse outcomes. In head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC), immunosuppression is a hallmark of the tumour and may be mediated by immunosuppressive inflammatory cells and PD-L1 expression. Given their participation in this process, our study aimed to describe the prognostic impact of these elements in tumour tissue and peripheral blood HNSCC patients. We conducted a multicentre retrospective study with biological samples and clinical data from HNSCC patients recruited at two centres in Brazil and the United Kingdom and healthy individuals. To analyse the inflammatory infiltrate, we used tumour tissue slides stained with haematoxylin and eosin and immunohistochemistry for PD-L1 analysis and neutrophil quantification. Absolute leukocyte counts were retrieved from pretreatment blood counts available in medical records. To evaluate the prognostic value of PD-L1 in liquid biopsy, we used serum and plasma samples obtained from patients and healthy individuals for quantification of soluble PD-L1 (sPD-L1) by ELISA. Fresh tumour tissue samples were used to analyse CD274 gene expression levels using the RT-qPCR technique. Furthermore, we analysed PD-L1 expression by flow cytometry in HNSCC cell lines and quantified sPD-L1 levels in the supernatant. The tumour microenvironment analysis showed that low levels of lymphocytes are associated with worse overall survival and disease-free survival. However, we did not observe this relationship with tumour-associated neutrophils and tumour PD-L1. When analysed together in a scoring system, we demonstrated that low levels of lymphocytes, high expression of PD-L1 and high infiltration of neutrophils are associated with a worse outcome. In blood, a high ratio of neutrophils and lymphocytes (NLR) was also associated with worse survival but was not correlated with inflammatory components of the tumour. High levels of sPD-L1 protein were associated with reduced overall survival, however our study did not identify a relationship between sPD-L1 levels in the blood and PD-L1 expression in tumour tissue, determined by immunohistochemistry and RT-qPCR. In contrast, the in vitro study showed that the levels of sPD-L1 released 14 into the supernatant are strongly correlated with cytoplasmic and membrane expression. Our data further showed that sPD-L1 levels in patients were positively correlated with the number of leukocytes, neutrophils and monocytes in peripheral blood. Taken together, our results highlight the prognostic potential of markers of the tumour microenvironment analysed in a combined manner, in a scoring system, as a way of providing a more comprehensive overview of tumour behaviour, highlighting important events, such as immunosuppression. Our results highlight the prognostic potential of PD-L1 detected by liquid biopsy in HNSCC and indicate that the levels detected in the blood do not necessarily correspond to what is observed in the tumour. Therefore, it is believed that it should be analysed as an independent marker whose immunosuppressive role is carried out at a systemic level
dc.description.resumoA imunossupressão é reconhecida como uma das marcas registradas do câncer e tem sido associada a pior desfecho. No carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP), a imunossupressão é uma característica marcante do tumor e pode ser mediada por células inflamatórias imunossupressoras e pela ação de PD-L1. Dada sua participação neste processo, o presente estudo teve como objetivo descrever o impacto prognóstico de componentes inflamatórios no tecido tumoral e no sangue periférico de pacientes com CECP. Para tanto, conduziu-se um estudo retrospectivo multicêntrico utilizando amostras biológicas e dados clínicos de pacientes com diagnóstico de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço recrutados em dois centros no Brasil e no Reino Unido e indivíduos saudáveis. Para análise do infiltrado inflamatório, foram utilizadas lâminas de tecido tumoral coradas em hematoxilina e eosina e imuno-histoquímica para análise de PD-L1 e quantificação de neutrófilos. Contagens absolutas de leucócitos foram recuperadas de hemogramas pré tratamento disponíveis em prontuários médicos. Para avaliar o valor prognóstico de PD-L1 em biópsia líquida, foram utilizadas amostras de soro e plasma obtidas de pacientes e indivíduos saudáveis para quantificação de PD-L1 solúvel (sPD-L1) por ELISA. Amostras de tecido tumoral fresco foram usadas para analisar os níveis de expressão gênica de CD274 pela técnica de RT-qPCR. Além disso, a expressão de PD-L1 por citometria de fluxo em linhagens celulares de CECP foi analisada e os níveis de sPD-L1 no sobrenadante do cultivo quantificados. A análise do microambiente tumoral mostrou que baixos níveis de linfócitos se associam a pior sobrevida global e sobrevida livre de doença, o que não foi observado em neutrófilos associados ao tumor e PD-L1 tumoral. Entretanto, quando analisados em conjunto em um sistema de pontuação, observou-se que baixos níveis de linfócitos, alta expressão de PD-L1 e alta infiltração de neutrófilos, se associam a pior desfecho. No sangue, a elevada razão de neutrófilos e linfócitos (RNL) também foi associada a pior sobrevida, 12 porém não foi correlacionada com elementos do microambiente tumoral. Elevados níveis da proteína sPD-L1 foram associados à sobrevida global reduzida, porém não foi encontrada relação entre os níveis de sPD-L1 no sangue e a expressão de PD-L1 no tecido tumoral, determinada por imuno-histoquímica e por RT-qPCR. Em contraste, o estudo in vitro mostrou que os níveis de sPD-L1 liberados no sobrenadante são correlacionados com os níveis de expressão citoplasmática e membranar. Os dados mostraram ainda que os níveis de sPD-L1 em pacientes foram correlacionados positivamente com a quantidade de leucócitos, neutrófilos e monócitos no sangue periférico. Em conjunto, os resultados deste estudo ressaltam o potencial prognóstico de marcadores do microambiente tumoral analisados de maneira combinada, em sistema de pontuação, como forma de fornecer um panorama mais abrangente do comportamento tumoral, destacando eventos importantes, como a imunossupressão. Estes resultados também destacam o potencial prognóstico de PD-L1 detectado por biópsia líquida em CECP, porém evidencia que os níveis detectados no sangue não necessariamente correspondem ao que é observado no tumor. Desse modo, acredita se que deva ser analisado como um marcador independente cuja ação imunossupressora é realizada a nível sistêmico
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Espírito Santo (Fapes)
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/17973
dc.languagepor
dc.language.isopt
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsembargoed access
dc.subjectCarcinoma epidermoide de cabeça e pescoço
dc.subjectMicroambiente imune tumoral
dc.subjectImunossupressão
dc.subjectPD-L1
dc.subjectBiópsia líquida
dc.subjectBiomarcador
dc.subject.cnpqBiotecnologia
dc.titlePotencial prognóstico de células inflamatórias e PD-L1 solúvel em carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço
dc.title.alternativePrognostic role of inflammatory cells and soluble PD-L1 in head and neck squamous cell carcinoma
dc.typedoctoralThesis
foaf.mboxbatistad.camila@gmail.com
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