Detecção de DNA masculino em amostras de crimes sexuais por PCR em tempo real

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dc.contributor.advisor-co1 Meira, Débora Dummer
dc.contributor.advisor-co1IDhttps://orcid.org/0000-0002-6092-2459
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7199119599752978
dc.contributor.advisor1Louro, Iuri Drumond
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000-0001-5160-9615
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3817361438227180
dc.contributor.authorWinkler, Cristina
dc.contributor.authorIDhttps://orcid.org/0009-0003-9122-7197
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/5989786847165265
dc.contributor.referee1Carvalho, Elizeu Fagundes de
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/0000-0003-4620-7253
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2742420738858309
dc.contributor.referee2Santos, Eldamária de Vargas Wolfgramm dos
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/0000-0003-3815-0760
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/4688343262832362
dc.date.accessioned2024-06-19T13:17:13Z
dc.date.available2024-06-19T13:17:13Z
dc.date.issued2024-03-14
dc.description.abstractThe insertion of genetic profiles in DNA databases revolutionized the investigation of sexual assault. Before this turning point, it was only possible to investigate cases with known sexual offenders. In Brazil, the use of DNA databases is recent, and, therefore, the processing of samples of cases without a suspect were not considered important until then. For this reason, Brazilian forensic DNA laboratories have a large amount of unanalyzed traces. In this context, increasing the number of genetic profiles inserted into databases can contribute to reducing these backlogs and solving cold cases. However, current DNA analysis practices typically focus on cases where semen is detected. In instances where screening yields negative results, the forensic analysis often concludes and, in most cases, seminal fluid is not detected. Real-time PCR is a technique with high sensitivity and specificity and is already widely used in forensic laboratories. Thus, this project aimed to evaluate the technical feasibility of real-time PCR as a screening method for male fluids in swab samples from women who are victims of sexual assault. After routine testing for semen screening at the Forensic Biology Laboratory of Civil Police of Espírito Santo, 176 swab samples were analyzed using four different qPCR assays. It was performed DNA quantification using a commercial kit with TaqMan probes and three different in house qPCR-duplex reactions with SYBR Green dye. In the DNA quantification assay, among the 84 samples with negative results for semen screening, 39 (46.4%) presented male DNA, a significant proportion often overlooked by most Brazilian forensic laboratories. The three SYBR Green-based qPCR-duplex assays did not show the same sensitivity as DNA quantification with TaqMan probes. This study demonstrated that the use of realtime PCR can be a robust tool for detecting Y DNA as a screening method to identify male contact in cases involving sexual assault.
dc.description.resumoA inserção de perfis genéticos em bancos de dados de DNA revolucionou a investigação de crimes sexuais. Antes dessa ferramenta, só era possível investigar casos com agressores sexuais conhecidos. No Brasil, o uso de bancos de dados de DNA é recente, e, por isso, o processamento de amostras de casos sem suspeitos não era considerado importante até então. Por essa razão, os laboratórios forenses de DNA brasileiros têm uma grande quantidade de vestígios não analisadas. Nesse contexto, aumentar o número de perfis genéticos inseridos nos bancos de dados pode contribuir para reduzir esses atrasos e resolver casos antigos. No entanto, as práticas atuais de análise de DNA geralmente se concentram em casos em que o sêmen está presente e, na maioria dos casos, esse material biológico não é detectado. A PCR em Tempo Real é uma técnica com alta sensibilidade, especificidade e já amplamente utilizada na rotina das análises forense. Assim, este projeto teve como objetivo avaliar a viabilidade técnica da PCR em Tempo Real como um método de triagem de material biológico masculino em amostras de suabes de mulheres vítimas de agressão sexual. Após testes de rotina para triagem de esperma no Laboratório de Biologia Forense da Polícia Civil do Espírito Santo, 176 amostras de suabes foram analisadas usando quatro diferentes ensaios de PCR em Tempo Real. Foi realizada a quantificação de DNA usando um kit comercial com sondas TaqMan e três diferentes reações de qPCR-duplex in house com corante SYBR Green. No ensaio de quantificação de DNA, entre as 84 amostras com resultados negativos para a triagem de sêmen, 39 (46,4%) apresentaram DNA masculino. Os três ensaios de qPCR-duplex baseados em SYBR Green não mostraram a mesma sensibilidade que a quantificação de DNA com sondas TaqMan. Este estudo demonstrou que o uso da PCR em Tempo Real pode ser uma ferramenta robusta para detectar o DNA masculino como um método de triagem para identificar o contato masculino em casos de agressão sexual.
dc.description.sponsorshipFAPES
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/17401
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsopen access
dc.subjectCromossomo Y
dc.subjecttriagem de sêmen
dc.subjectBacklog de vestígios de crimes sexuais
dc.subjectgenética forense
dc.subject.br-rjbnsubject.br-rjbn
dc.subject.cnpqÁrea(s) do conhecimento do documento (Tabela CNPq)
dc.titleDetecção de DNA masculino em amostras de crimes sexuais por PCR em tempo real
dc.title.alternativeDetection of male DNA in sexual assault samples by real-time PCR
dc.typemasterThesis
foaf.mboxemail@ufes.br
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