Isolamento, cultura e efeito de Viscum album L., doxorrubicina e associação na morfologia e expressão proteica de linhagem celular primária de adenomioepitelioma maligno canino

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dc.contributor.advisor-co1Archanjo, Anderson Barros
dc.contributor.advisor-co1IDhttps://orcid.org/0000-0002-9305-271X
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5529149503714764
dc.contributor.advisor1Trivilin, Leonardo Oliveira
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000-0002-3039-3269
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5723897284006298
dc.contributor.authorAngelos, Tamires de Almeida
dc.contributor.authorIDhttps://orcid.org/0009-0001-6359-5115
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/7375975428092053
dc.contributor.referee1Boeloni, Jankerle Neves
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/0000-0003-0049-6854
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7669632202047727
dc.contributor.referee2Oliveira, Mayara Mota de
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/0000-0003-2735-9788
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/5495329160438980
dc.date.accessioned2025-08-26T19:03:08Z
dc.date.available2025-08-26T19:03:08Z
dc.date.issued2025-04-25
dc.description.abstractBreast cancer is the disease that most affects female dogs in veterinary medicine, lacking precise therapies that affect only cancer cells, helping in tumor eradication and survival. Thus, the objective of this study was to isolate and cultivate a primary canine malignant adenomyoepithelioma (AME) cell line, and to evaluate the individual effects and the association of Viscum album L. (D3 dilution) and doxorubicin on the morphology and expression of BAX, BCL-XL, OGG, GPX and REF1 of a primary canine malignant adenomyoepithelioma cell line. A canine malignant adenomyoepithelioma sample from a 9-year-old SRD bitch was used for isolation and primary culture of cancer cells. Previously, the working LC50 of Viscum album L. (D3 dilution) was established in 24 and 48h (37.07 μL/mL), as well as the working concentration of doxorubicin, also after 24 and 48h of viability assay, defining the concentration 1.56 μg/mL, using cancer cells in primary culture, 20th pass. The concentrations determined were used for cell morphology and protein expression assays by immunohistochemistry after exposure for 24 and 48 hours to the treatments Viscum album L., doxorubicin and Viscum album L + doxorubicin association. The morphological findings showed minimal morphological differences compared to the control group, acting mainly as a cytoprotective agent, while doxorubicin alone and in association strongly induced cell death. The weak positive expression score maintained at 24 hours in the BAX, BCL-XL and GPX proteins in the Viscum album L. and doxorubicin groups compared to the control group, differing only from the associated treatment Viscum album L. + doxorubicin. At 48 hours, the weak positive score remained present in all treatments compared to the control group in GPX and BAX, differing only in BCL-XL the Viscum album L. and doxorubicin groups compared to the control and association group that presented a positive score. When comparing the times, it was obtained that doxorubicin increases the expression of GPX and BAX in addition to decreasing BCL-XL in 48 hours while the association acts by increasing the pro apoptotic protein. Viscum album L. decreased the nuclear labeling of OGG, while doxorubicin increased OGG and decreased the labeling of REF-1. The association of the compounds led to an increase in OGG and a decrease in REF-1. It is mainly concluded that the association of Viscum album L. and doxorubicin potentiate their mechanisms of action in a time-response manner, in addition to the fact that in SMA, isolated treatments induce the activation of other types of programmed cell death, in addition to apoptosis.
dc.description.resumoO câncer de mama é a doença que mais acomete cadelas na medicina veterinária, carecendo de terapias precisas que afetem apenas células cancerosas, auxiliando na erradicação tumoral e sobrevida. Assim, objetivou-se isolar e cultivar uma linhagem primária de adenomioepitelioma maligno canino (AME), e avaliar os efeitos individuais e da associação de Viscum album L. (diluição D3) e doxorrubicina na morfologia e expressão de BAX, BCL-XL, OGG, GPX e REF-1 de uma linhagem celular primária de adenomioepitelioma maligno canino. Utilizou-se uma amostra de adenomioepitelioma maligno canino proveniente de uma cadela SRD de 9 anos, para isolamento e cultivo primário das células cancerosas. Previamente, estabeleceu-se a CL50 de trabalho de Viscum album L. (diluição D3) em 24 e 48h (37,07 µL/mL), bem como da concentração de trabalho de doxorrubicina, também após 24 e 48h de ensaio de viabilidade, definindo a concentração 1,56 µg/mL, utilizando células cancerosas em cultivo primário, 20ª passagem. As concentrações determinadas foram utilizadas para os ensaios de morfologia celular e expressão proteica por imunohistoquímica após exposição durante 24 e 48h aos tratamentos Viscum album L., doxorrubicina e associação Viscum album L + doxorrubicina. Os achados morfológicos demonstraram Viscum album L. apresentou mínimas diferenças morfológicas comparadas ao grupo controle, atuando principalmente, como agente citoprotetor enquanto doxorrubicina isolada e em associação induziram fortemente à morte celular. O escore de expressão fraco positivo manteve em 24h nas proteínas BAX, BCL-XL e GPX nos grupos Viscum album L. e doxorrubicina comparado ao grupo controle, diferindo apenas do tratamento associado Viscum album L. + doxorrubicina. Em 48h, o escore fraco positivo se manteve presente em todos os tratamentos comparado ao grupo controle em GPX e BAX diferenciando apenas em BCL-XL os grupos Viscum album L. e doxorrubicina comparado ao grupo controle e associação que apresentaram escore positivo. Ao comparar os tempos, obteve-se que a doxorrubicina aumenta a expressão de GPX e BAX além de diminuir BCL-XL em 48 horas enquanto a associação atua aumentando a proteína pró apoptótica. Viscum album L. diminuiu a marcação nuclear de OGG, enquanto doxorrubicina aumentou OGG e diminuiu a marcação de REF-1. A associação dos compostos acarretou um aumento de OGG e diminuição de REF-1. Conclui-se principalmente que a associação de Viscum album L. e doxorrubicina potencializam seus mecanismos de ação de forma tempo-resposta, além de em AME, os tratamentos isolados induzem a ativação de outros tipos de morte celular programada, além da apoptose.
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/20171
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Ciências Veterinárias
dc.publisher.departmentCentro de Ciências Agrárias e Engenharias
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
dc.rightsopen access
dc.subjectCultivo primário
dc.subjectEstresse oxidativo
dc.subjectOncologia veterinária
dc.subject.cnpqCiências Agrárias
dc.titleIsolamento, cultura e efeito de Viscum album L., doxorrubicina e associação na morfologia e expressão proteica de linhagem celular primária de adenomioepitelioma maligno canino
dc.typemasterThesis
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