A influência da modulação por TLR2, TLR4 e TLR9 na resposta de células T reguladoras em cultura de sangue periférico de indivíduos com infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis, desafiadas in vitro com o bacilo de Koch

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dc.contributor.advisor1Rodrigues, Ricardo Ribeiro
dc.contributor.authorSilva, Flávia Dias Coelho da
dc.contributor.referee1Zeidler, Sandra Lúcia Ventorin Von
dc.contributor.referee2França, Johara Boldrini
dc.contributor.referee3Palaci, Moises
dc.contributor.referee4Pereira, Fausto Edmundo Lima
dc.date.accessioned2018-09-13T23:24:27Z
dc.date.available2018-09-13
dc.date.available2018-09-13T23:24:27Z
dc.date.issued2018-07-10
dc.description.abstractLatent tuberculosis infection (LTBI) affects approximately a quarter of the world's population. During LTBI, M. tuberculosis (Mtb) survives in a state of dormancy, which reactivates latent infection, which resumes normal growth and metabolism. Macrophages / monocytes (MO) play a central role in the mycobacterial pathogenesis, since they are the main cellular niche for Mtb during infections. The protective immune response, which the MO are part of is influenced by suppressive mechanisms, among them the increase of the activity of T regulatory cells (Tregs). Tregs have the ability to control tissue damage by decreasing adequate control of mycobacterial replication, and may also be involved in the reactivation and dissemination of Mtb. Toll-like receptors (TLRs) participate in the response to the infection by detecting and regulating it, and TLR2, TLR4 and TLR9 are known to recognize components of Mtb, which influence the response to kinetics and cytokine production by infection. We sought to assess the influence of TLR2, TLR4 and TLR9 agonists and antagonist in peripheral blood and Mtbchallenged whole blood cultures of individuals with LTBI (TST+ group) relative to the negative control (TST- group), investigating the frequency of Tregs and MO cells, the microbicidal activity and the dosage of cytokine IL10, IL17, TGFβ and IFNγ among these groups. Higher frequency of MO (CD14+ CD16+ HLA-DR+ , CD14+ TLR2+ HLA-DR+ , CD14+ TLR4+ HLA-DR+ , CD14+ TLR9+ HLA-DR+ ) was observed in the peripheral blood of LTBI/TST+ individuals. In the action of TLR2, TLR4 and TLR9 agonists or of TLR9 antagonist, under the frequency of Tregs cells from Mtb-challenged whole blood cultures, there was a higher frequency of these cells in the TST+ group, which was reduced after the use of TLR9 antagonist (chloroquine). As regards the influence of Mtb infection on the cultures, the microbicidal activity was lower in the TST+ group. In cultures infected with Mtb and TLRs-modulated, there was a reduction of the microbicidal activity in the TST+ group, during stimulation with TLR2 agonist, and, in the same individuals, in the stimulus with TLR9 antagonist, it was observed the restoration of the microbicidal activity. As for the dosage of cytokine in the same cultures, there was a higher production of IL10, IL17 and IFNγ in the TST+ group, especially after modulation with chloroquine, compared to the TST- group. In summary, LTBI differs from the control TST- by the higher frequency of Tregs and MO and the lower microbicidal activity, whereas the TLR9 blockade, by the use of chloroquine, resulted in the reduction of Treg cell frequency, in the higher production of IL17, IFNγ and IL10 and in the improvement of the microbicidal activity of LTBI in relation to TST-.eng
dc.description.resumoA infecção latente por Mycobacterium tuberculosis (LTBI) afeta aproximadamente um quarto da população mundial. Durante a LTBI, o M. tuberculosis (Mtb) sobrevive num estado de dormência, que na reativação da infecção latente, este retoma o crescimento e o metabolismo normais. Os macrófagos/monócitos (MO) desempenham um papel central na patogênese micobacteriana, uma vez que são o principal nicho celular para o Mtb durante as infecções. A reposta imune protetora, a qual os MO fazem parte é influenciada por mecanismos supressores, entre eles o aumento da atividade das células T reguladoras (Tregs). Tregs têm a capacidade de controlar o dano tecidual ao diminuir o controle adequado da replicação micobacteriana, e também, podem estar envolvidas na reativação e disseminação do Mtb. Os receptores Toll-like (TLRs) participam da resposta à infecção detectando e regulando-a, sendo os TLR2, TLR4 e TLR9 conhecidos por reconhecer componentes do Mtb, o que influencia na resposta, inclusive, na cinética e produção de citocinas pela infecção. Buscou-se com essa pesquisa avaliar a influência dos agonistas e antagonista dos TLR2, TLR4 e TLR9, em sangue periférico e em culturas de sangue total desafiadas com o Mtb, de indivíduos com LTBI (grupo TST+) em relação ao controle negativo (grupo TST-), investigando a frequência de células Tregs e MO, a atividade microbicida e a dosagem de citocinas IL10, IL17, TGFβ e IFNγ, entre esses grupos. O que se observou foi uma maior frequência de MO (CD14+CD16+HLA-DR+ , CD14+TLR2+HLA-DR+ , CD14+TLR4+HLA-DR+ , CD14+TLR9+HLA-DR+ ), no sangue periférico de indivíduos LTBI/TST+. Na ação de agonistas de TLR2, TLR4 e TLR9 ou de antagonista de TLR9, sob a frequência de células Tregs de culturas de sangue total desafiadas com Mtb, houve maior frequência dessas células no grupo TST+, que foi reduzida após o uso de antagonista de TLR9 (cloroquina). Quanto à influência da infecção por Mtb nas culturas, a atividade microbicida foi menor no grupo TST+. Nas culturas infectadas e moduladas com TLRs, houve redução da atividade microbicida no grupo TST+, durante estimulação com agonista de TLR2, e nesses mesmos indivíduos, no estímulo com antagonista de TLR9, observou-se a restauração da atividade microbicida. Quanto à dosagem de citocinas nas mesmas culturas, houve maior produção de IL10, IL17 e IFNγ no grupo TST+, especialmente, após modulação com cloroquina, em relação ao grupo TST-. Em suma, LTBI difere do controle TST- pela maior frequência de Tregs e MO e pela menor atividade microbicida, ao passo que o bloqueio de TLR9, pelo uso da cloroquina, resultou na redução da frequência de células Tregs, na maior produção de IL17, IFNγ e IL10 e na melhora da atividade microbicida de LTBI em relação ao TST-.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/10443
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Doenças Infecciosas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Doenças Infecciosas
dc.rightsopen access
dc.subjectTreg cellseng
dc.subjectMonocyteseng
dc.subjectCytokineseng
dc.subjectMtbpor
dc.subjectLTBIpor
dc.subjectTLRpor
dc.subjectCélulas Tregpor
dc.subject.br-rjbnMycobacterium tuberculosis
dc.subject.br-rjbnMonócitos
dc.subject.br-rjbnCitocinas
dc.subject.cnpqDoenças Infecciosas e Parasitárias
dc.subject.udc61
dc.titleA influência da modulação por TLR2, TLR4 e TLR9 na resposta de células T reguladoras em cultura de sangue periférico de indivíduos com infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis, desafiadas in vitro com o bacilo de Koch
dc.typedoctoralThesis
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