Desenvolvimento e caracterização de sondas fluorescentes derivadas de BODIPY para aplicação em bioconjugação com proteínas

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dc.contributor.advisor1Rezende, Lucas Cunha Dias de
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000000240953135
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6353284950167322
dc.contributor.authorAmorim, Vanessa Gobbi
dc.contributor.authorIDhttps://orcid.org/0000000264968622
dc.contributor.authorLattes http://lattes.cnpq.br/7088803424430876
dc.contributor.referee1Silva, Andre Romero da
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/0000000214976093
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3079774974302460
dc.contributor.referee2Campagnaro, Bianca Prandi
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/0000-0002-9023-4892
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/6847063606394701
dc.date.accessioned2024-05-30T00:48:54Z
dc.date.available2024-05-30T00:48:54Z
dc.date.issued2020-12-09
dc.description.abstractFluorescence is part of a phenomenon of light emission by cold bodies, known as luminescence. Fluorescence is widely used in the analyses and detection of substances, diseases and other processes. Its application requires the use of compounds capable of absorbing light and emitting it in the form of fluorescence at different wavelengths. However, only a few compounds have natural fluorescence and, in many fluorescence analyzes it is necessary to add fluorescent probes. Depending on the specific application of the fluorescent probe, functional groups can be inserted into its structure. In this work, aiming at the development of fluorescent probes for bioconjugation with proteins, two compounds of the borondipyrrometene class (BODIPY) were used, functionalized with the isothiocyanate group. These compounds were tested by spectrophotometry and spectrofluorimetric analyses to evaluate the photophysical properties of the developed fluorescent probes. The applicability of fluorescent probes in bioconjugation was tested using a serum bovine albumin as model protein. The bioconjugation product was characterized by spectrophotometry, spectrofluorimetric and SDS-PAGE. In addition, an initial test was performed to evaluate a possible fluorophore application with conjugation to a primary antibody in an immunofluorescent assay by Western Blotting. The results of bioconjugation are promising, where it was found that the two compounds used in the study showed the ability to conjugate with the protein and emit fluorescence. It was also verified the interference of the thiourea bond formed after conjugation of each compound with the serum bovine albumin in the fluorescence intensity, observing its reduction. In the Western Blotting assay, it was observed that there was conjugation with the primary antibody and recognition of the chosen protein. However new analyses need to be carried out to standardize their applicability. The results of the present study represent an advance in the functional applications of BODIPY, generating perspectives for new prospects regarding its molecular uses
dc.description.resumoA fluorescência faz parte de um fenômeno de emissão de luz por corpos frios, conhecido como luminescência, sendo muito utilizada na análise e detecção de substâncias, doenças e outros processos. A sua aplicação demanda a utilização de compostos capazes de absorver a luz e emiti-la na forma de fluorescência em comprimentos de ondas diversos. No entanto, apenas poucos compostos possuem fluorescência natural sendo que em muitas análises por fluorescência se faz necessária a adição de sondas fluorescentes. Dependendo da aplicação específica da sonda fluorescente, grupos funcionais podem ser inseridos na sua estrutura. Neste trabalho, visando o desenvolvimento de sondas fluorescentes para bioconjugação com proteínas, foram utilizados dois compostos da classe dos borodipirrometenos (BODIPY), funcionalizados com o grupo isotiocianato. Para tanto, foram realizados experimentos de espectrofotometria e espectrofluorimetria para avaliar as propriedades fotofísicas das sondas fluorescentes desenvolvidas. A aplicabilidade das sondas fluorescentes em bioconjugação foi testada utilizando a albumina bovina sérica como proteínas modelo. Os produtos da bioconjugação foram caracterizados por espectrofotometria, espectrofluorimetria e SDS-PAGE. Além disso, foi realizado um teste preliminar para avaliar uma possível aplicação do fluoróforo com a conjugação em um anticorpo primário em um ensaio imunofluorescente por Western Blotting. Os resultados de bioconjugação se mostraram promissores, no qual verificou se que os dois compostos usados no estudo possuem capacidade de se conjugar com a proteína e emitirem fluorescência. Além disso, foi verificada a interferência da ligação tiouréia formada após conjugação de cada composto com a albumina bovina sérica na intensidade de fluorescência, levando a redução da mesma. No ensaio Western Blotting foi observado que houve conjugação com o anticorpo e marcação da proteína escolhida, todavia se tratou de um teste inicial que deve ser padronizado. Os resultados do presente trabalho representam um avanço na aplicação funcional de BODIPY gerando perspectivas de novas prospecções quanto a sua utilização molecular
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Espírito Santo (FAPES)
dc.description.sponsorshipFundação Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/14065
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Bioquímica
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica
dc.rightsopen access
dc.subjectBODIPY
dc.subjectFluorimetria
dc.subjectIsotiocianato
dc.subjectTiouréia
dc.subjectAlbumina
dc.subjectFluorimetry
dc.subjectIsothiocyanate
dc.subjectThiourea
dc.subjectAlbumin
dc.subject.br-rjbnsubject.br-rjbn
dc.subject.cnpqFarmacologia Bioquímica e Molecular
dc.titleDesenvolvimento e caracterização de sondas fluorescentes derivadas de BODIPY para aplicação em bioconjugação com proteínas
dc.title.alternativeDevelopment and characterization of fluorescent probes derived from BODIPY for application in bioconjugation with proteins
dc.typemasterThesis
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